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elisa試劑盒實驗操作標準化之保溫

點擊次數:287 日期:2019/9/4 15:06:16

在elisa試劑盒實驗中一般有兩次抗原抗體反應,即加標本物和加結合物后,此時反應的溫度和時間應按規定的要求,保溫容器最好是水浴箱,可使elisa試劑盒實驗中的溫度保持平衡。elisa試劑盒實驗中各elisa板不應該疊在一起。為了避免蒸發,板上應加蓋,或者將板平放在底部墊有濕紗布的濕盒中,濕盒應該是金屬的,傳熱容易。

ELISA屬固相免疫測定,抗原、抗體的結合只在固相表面上發生。以抗體包被的夾心法為例,加入板孔中的標本,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結合的機會,只有最貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐步平衡的過程,因此需經擴散才能達到反應的終點。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結合也同樣如此。這就是為什么ELISA試劑盒實驗反應總是需要一定時間的溫育。

elisa試劑盒實驗中溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃(冰箱溫度)等。37℃是elisa試劑盒實驗室中常用的保溫溫度,也是大多數抗原抗體結合的合適溫度。在建立ELISA方法作反應動力學研究時,實驗表明,兩次抗原抗體反應一般在37℃經1-2小時,產物的生成可達頂峰。為加速反應,可提高反應的溫度,有些elisa試劑盒試驗在43℃進行,但不宜采用更高的溫度?乖贵w反應4℃更為徹底,在放射免疫測定中多使反應在冰箱中過夜,以形成最多的沉淀。但因所需時間太長,在ELISA試劑盒實驗中一般不予采用。

 

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